免疫熒光染色!
這個實驗步驟的結果,將掲示最終的答案。
若是結合,那彭月嬌的怪病,或許有了新的轉機。
但如果沒有發生結合……恐怕所有人都會再次茫然,研究也將陷入新的怪圈之中!
此刻,即便是莫雷蒂,心情都有些緊張了。
而許秋則依舊平靜。
並且,熒光染色的步驟,也經過了他的改良。
相比於常規的“單張玻片僅包被一種抗原”做法,許秋采取的方案,是用聚賴氨酸包被玻片用疏水筆劃分三區,三區分彆包被活菌、熱滅活菌以及1%TritonX-100裂解菌。
這種做法的優勢很大。
一來,可以消除玻片表麵性質差異導致的結合偏差。
二則是能夠同時展示抗原構象變化對結合的影響。
從活菌,到熱滅活菌,再到利用去汙劑TritonX-100裂解細胞組織獲得蛋白的裂解菌液……
說得直白一點,活菌就是全活,熱滅活菌就是活一半,而裂解菌則是全死……後者的作用,是用於確定結合隻發生在熱滅活菌暴露的抗原表位之上。
而且在進行熒光標記時,許秋也微調了所用材料。
此前,他們用的是FITC標記。
它激發488nm,很容易與組織自發熒光混淆。
畢竟生物樣本中最常見的自發熒光就是綠色,與FITC標記高度重合,很容易認錯。
而許秋,則換成了AlexaFluor594標記。
這種標記,激發在590nm,而且顏色為紅色!
幾乎不會與自發熒光混淆!
“太細節了……”
“連熒光的激發與自發熒光混淆都考慮到了?”
“我之前一直用的FITC標記,有幾次碰到的熒光反應很強烈,還以為是出成果了,後來才發現是樣本中的脂褐素自己在發光……給我白高興一場!”
“換用AlexaFluor594,則能完全避免這個問題!”
莫雷蒂等人驚歎不已。
而邱偉、張驍等科研人員,則是更加振奮。
這便是他們不願意錯過許秋的實操研究的原因了。
許秋的手術堪稱完美。
而他做研究,也講究精雕細琢。
很多細節上的處理,都極為巧妙。
作為科研人員的他們,看得爽是一回事,另外的關鍵在於——他們也能借此得到感悟,將同樣的手法用在往後的科研之中!
這才是最大的裨益!
……
而在眾人目不轉睛的注視之中,實驗終於到了最後階段。
熒光染色完成。
接著,是用ImageJ量化熒光強度,通過對比ROI內平均像素值,比較三個區域的結合差異。
所有人都緊張起來。
就連莫雷蒂,都有種手心冒汗的感覺!
這個結果,將決定今晚的努力是否白費了。
許秋的動作卻很快。
他直接就開始對比三個區域。
當看到結果時,所有人的眼睛都瞪大了。
活菌區,依舊呈現出微弱非特異性熒光,且平均強度小於15AU。
而1%TritonX-100裂解菌區域,則完全無熒光,意味著無結合。
而中心區域,熱滅活菌區,強烈的熒光信號仿佛是一輪誕生於載玻片上的太陽,極其醒目,且平均強度甚至達到了182AU!
足可見結合之激烈!
這一刻,所有人都振奮起來。
“果然……發生了特異性結合!”
“這可比當時埃米爾教授的偶然結合要強烈多了!”
“物化協同,采取β-巰基乙醇還原菌體表麵蛋白,釋放了被遮蔽的抗原決定簇……這讓結合更加順利地發生!完全是點睛之筆!”
“……”
莫雷蒂等人無比激動。
這一幕,簡直是歎為觀止!
段善繼臉色都激動得漲紅,到:“這或許能證明,活菌沒法引起怪病,恰恰是死去的嗜沫凝聚杆菌……
“這樣就完全能解釋通了。不管是埃米爾教授之前碰到的病人,還是彭月嬌……他們的發病,都是在嗜沫凝聚杆菌控製了之後!
“此時引發他們怪病的,是已經死去、但仍舊殘留在機體內的嗜沫凝聚杆菌!”
當然,直到如今,這仍然隻是一個猜想。
畢竟這還隻是實驗室的結果。
想要驗證,唯有做動物模型進行最後的確認。
許秋自然也是知道這一點。
好在,大夏神外研究所這邊,最不缺的就是實驗動物了。
很快,SD大鼠就被送了過來。
依舊是許秋操刀。
對照組,是健康人的純化IgG。
而實驗組,則是患者彭月嬌的純化IgG。
經過此前的實驗,他們已經可以確定一點,彭月嬌的怪病,主要的效應抗體基本上IgG了。
畢竟它本身就是慢性免疫反應的主要效應抗體,且可透過血腦屏障攻擊神經組織。
具備引發怪病的先天條件。
相比之下,IGM分子量大,不容易透出血管,更彆提是通過血腦屏障了。
而如今要做的動物實驗,就是用健康人的IgG與彭月嬌的IgG,依次與熱滅活菌液後的產物進行反應。
若是實驗組SD大鼠身上出現類似的表現,則基本上可以證明彭月嬌的怪病源於此了。
很快,一批批SD大鼠完成了尾靜脈注射。
此後就是漫長的等待了。
這個過程,放在人類,或者是其他大型實驗動物身上,可能需要數天,乃至於數周才有可能看到症狀。
然而在實驗室的大鼠之上,卻能迅速捕捉到指標的變化!
最為直接的變化是,實驗組,也即模擬彭月嬌身體情況的SD大鼠,此時的靜息心率開始迅速提升!
並且最為顯著的是,實驗組大鼠走路開始變得不協調……
這或許代表著,它們的肌群肌力已經出現了變化。
此時,所有人都振奮起來。
彭月嬌怪病的表現,就有靜息心率提升、右前臂背側肌群肌力突然大幅度下降!
“還有,檢測大鼠的免疫抑製狀態、以及排查機體針對移植神經的特異性攻擊……”
這些都是彭月嬌怪病的典型表現!
此刻眾人表情都頗為亢奮。
眼前的實驗動物,幾乎在完美複現出彭月嬌當時的表現,這讓他們都有些瘋狂了。
折騰了這麼久,他們始終沒有任何線索。
而如今,猶如黎明破曉,他們總算是看到了希望!
破開彭月嬌怪病的希望!
此刻,最興奮的莫過於埃米爾了。
他等待多年,一直在等第二個病人出現,想要借此找到這一疾病的致病真相。
然而等真碰到了彭月嬌,他才發現是自己想得太簡單了!
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